基于 tRNA 切割系统的多顺反子 gRNA 提升刚地弓形虫 CRISPR 基因组编辑效率

研究在刚地弓形虫中比较 U6 与 H1 启动子及标准/修饰 gRNA 支架，U6 驱动构建体可产生稳定的 Cas9 靶向活性，H1 驱动构建体未检测到表型。修饰 gRNA 支架较标准支架提高敲除效率；靶向 SAG1 与 UPRT 的 U6 驱动 tRNA 多顺反子构建体实现高效 SAG1 敲除和 5-氟脱氧尿苷耐药，而 H1 驱动构建体仅 3′ gRNA 有功能。